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  南宁亲子鉴定就过程所引起的污染问题思考

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      (一)隔离的PCR准备室

      避免PCR产物造成转入(carry over)污染,应将PCR反应进行前与PCR反应进行后之工作区隔离。PCR之试液配制应在无菌操作柜调配,配制妥当后,应以紫外灯破坏残留的DNA,避免污染下一个操作程序。PCR产物之储存区应与其他DNA或试剂隔离。

      (二)使用灭菌溶液

      去离子水、缓冲液及其他实验器材,如微量吸管头(tip)、微量试管(eppendorf)等应定期灭菌,灭菌处理可将细菌DNA裂解成无污染的小分子。 

      (三)分装试剂集中调配

      PCR试剂应尽可能分装保存在无PCR产物区,调配时,应集中配制使用预拌溶液,以减少重复吸取过程中的污染机会,亦可提高PCR配液之效率。

     (四)避免试剂喷溅

      配制反应液的步骤中,使用微量吸管之吸取、注入及微量试管之开盖时,均可能因动作过大而使试剂溅出,造成污染。

      (五)最后加入DNA模板

      所有南宁亲子鉴定www.nndna.com/试剂配制完成且分注入反应之微量试管后,才可加入DNA模板,以避免转入污染的发生。

     (六)制作控制实验

      也就是阳性反应与阴性反应同时进行之意,在阳性反应中选用含一百个模板之DNA量,在阴性反应溶液中,不加入任何DNA模板,其余反应试剂均与    样本反应相同,两者与样本同时进行PCR反应,不仅可检视PCR 污染情形,亦可验证PCR之效率。 

     (七)以盐酸清洗器皿

      各种与配制PCR反应相关之器皿,若不宜以高温灭菌去除残留DNA 时,应以1M盐酸浸泡,去除DNA之嘌呤物。

     (八)重复实验

      若对PCR实验www.gxdnaf.com/结果存疑时,最好的解决方法是重新做一次实验。虽然由阴性反应结果可以排除污染因素,但是突发的污染源却是不易发觉,尤其PCR反应试剂众多,步骤繁复,稍有不慎即有可能造成污染。

 

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